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泡菜汙廢水處理

高鹽廢水是指鹽度（以ＮａＣｌ計）至少為10％（質量分數）的廢水，主要包括含鹽工業廢水、含鹽生活汙（wū）水和其他含鹽廢水。四川泡菜是具有地方特色的發酵蔬菜製品，泡製泡菜（cài）後的高鹽廢水通常鹽度達到（dào）5.0％左右，其中含有大量的嗜鹽菌（jun1）。

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高鹽廢水是指（zhǐ）鹽度（以ＮａＣｌ計）至少為10％（質量分數）的廢水，主（zhǔ）要（yào）包括含鹽工業廢水、含鹽生活汙水和其他含鹽廢水。四川泡菜是具（jù）有地方特色的發酵蔬菜製品，泡製泡（pào）菜後（hòu）的高鹽廢水通常鹽度達到5.0％左右，其（qí）中含有大量的嗜鹽菌。由於（yú）嗜鹽菌具有特殊的結構和理化性質，能抵抗高鹽（yán）濃度（dù）環境脅迫，不易汙染，可減少發（fā）酵工藝（yì），降低成本，因此常用於發酵生產（chǎn）。嗜鹽菌種類繁多，它們的分類主要依據三個方麵（miàn）：表型（xíng）特征（zhēng）、化（huà）學（xué）分類數據和分子生物學數據。

嗜鹽菌（jun1）的分離和菌體的培養　

　　將冷凍（dòng）保藏（cáng）的高鹽廢水置於培養箱中解凍（dòng）活化，取0.1ｍＬ到ＥＰ管中，再加入0.9ｍＬ已滅菌（jun1）的蒸餾水，用漩渦振蕩器混合均勻。從中（zhōng）取200μＬ均勻塗布於ＬＢ培養基（其中ＮａＣｌ濃度為１５％）上，37℃倒（dǎo）置培養48ｈ。從長出（chū）的菌中挑選20株長勢較好的菌株轉接到新（xīn）的LB培養基上，並對每一株菌進行（háng）編號。

再對每株菌進行反複劃（huá）線，直到得到單菌落。後將分離得到的菌劃線於保藏管中保藏待用。配製液體ＬＢ培養基300ｍＬ，分別置（zhì）於３個（gè）三角瓶中，選取３株長勢較好，差異較大的菌分別接種於３個（gè）三角瓶中，並作（zuò）好標記，於37℃，200ｒ／ｍｉｎ搖床培養,17ｈ。

16ＳｒＤＮＡ序列及係統發育分析

基因（yīn）組ＤＮＡ的（de）提取和１６ＳｒＤＮＡ的擴增及序列分析參見Ｔｏｒｕ　Ｓｈｉｇｅｍａｔｓｕ等方法。引物采用（yòng）細菌１６ＳｒＤＮＡ　ＰＣＲ擴增通用引物（wù）Ｅｕ２７Ｆ（５′ －ＡＧＡＧＴＴＴＧＡＴＣＣＴＧＧＣＴＣＡＧ－３′ ，１０ μ Ｍ）和原核微生物特異引（yǐn）物１４９０Ｒ（５′ －ＧＧＴＴＡＣＣＴＴＧＴ　ＴＡＣＧＡＣＴＴ－３′ ，１０ μ Ｍ）。ＰＣＲ擴增條件：９４℃ 變性１ｍｉｎ，５０℃ 退火１．５ｍｉｎ，７２℃ 延伸２ｍｉｎ，３０個循環。ＰＣＲ產物經ｐＧＥＭ－Ｔ載體Ｔ－Ａ克隆入Ｅ．ｃｏｌｉ　ＤＨ　５α ，挑選陽性菌落，提取重組質粒。將質粒送ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司進行序（xù）列測定，並將測得的序列去載體後提交到ＮＣＢＩ進行比對，將所測序結果與數據（jù）庫中已知序列在ＧｅｎＢａｎｋ數據庫中比對，獲得與實驗菌株相似的（de）典型菌株１６ＳｒＤＮＡ序列，選取序列用Ｃｌｕｓｔａｌ　Ｘ和ＭＥＧＥ　４．０繪製係統發育樹，對所構建的係（xì）統發育樹評估。

三、結果

1.嗜鹽菌的（de）分離結果（guǒ）

劃線分離後（hòu）得到的（de）單菌落和終分離得到的２０株單菌。由圖（tú）1，圖2可知（zhī），分離得到的這２０株單菌株（zhū）有一定的耐鹽性，能在含鹽量為（wéi）１５％的ＬＢ培（péi）養基上生長；嗜鹽菌菌（jun1）落部分為白色，部（bù）分為黃色，扁平，表麵光滑，濕潤，直徑在１～２ｍｍ左右。挑選出差別較大菌株分（fèn）別命名為ＭＳ１、ＭＳ２、ＭＳ３。